汤姆猫和和老鼠杰瑞生活在同一屋檐下，不同于其他水火不容的猫鼠关系，他们更像是一对欢喜冤家、一对打闹不断却拆不散的朋友。本季猫和老鼠的故事主要围绕四个主题展开，分别为汤姆和杰瑞的日常故事、由汤姆和杰瑞组成的侦探小分队侦破各种案件、诡异夜晚怪物频出的夜晚被赶出家门的汤姆和镇上的怪物猎人杰瑞的故事以及城堡中的管家汤姆和不受待见的老鼠杰瑞的故事。
《猫和老鼠》以闹剧为特色，描绘了一对水火不容的冤家：汤姆和杰瑞猫鼠之间的战争，片中的汤姆经常使用狡诈的诡计来对付杰瑞，而杰瑞则时常利用汤姆诡计中的漏洞逃脱他的迫害并给予报复。
故事叙述一只叫暮光闪闪(Twilight Sparkle)的小马为了执行导师塞拉斯提娅公主（Princess Celestia）给她的任务，与助手斯穗龙（Spike）一起来到小马镇学习有关友谊的魔法的知识，其中她认识了苹果杰克（Applejack）、瑞瑞（Rarity）、小蝶（Fluttershy）、云宝黛西（Rainbow Dash）与碧琪（Pinkie Pie）五位好朋友，每只小马都代表着友谊的每个元素，并在和谐水晶（Elements of Harmony）中，各扮演重要的关键元素。此后，暮光闪闪(Twilight Sparkle)便与她认识的新朋友们开始了有趣的日常生活，在第四季时暮光闪闪（Twilight Sparkle）和她的五个朋友在第四集以及之后开始写日记。